白芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactifora Pall.的干燥根，味甘、酸、苦，微寒，归肝、脾经，具有养血敛阴，柔肝止痛，平抑肝阳的功效。临床常用于治疗血虚或肝气不调所致的月经不调，经行腹痛、胁痛、四肢挛痛，及肝阳上亢头痛眩晕等[1]。白芍为中医临床常用药，通过与不同药物配伍，可广泛用于多种疾病的治疗[2]。现代药理研究表明，白芍主要有效成分芍药苷具有镇静镇痛、解痉解热、抗菌抗炎、保肝及增强免疫等作用[3]，与其传统功用十分相吻合。为了进一步研究配伍对其芍药苷煎出量的影响，本实验采用高效液相(HPLC)色谱法测定当归、玫瑰花药物与白芍配伍后其芍药苷煎出量，以期更好指导临床合理配伍用药。
1 仪器与试药
1.1 仪器高效液相色谱仪(安捷伦)，色谱柱XDB C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);真空泵：SHZ-D循环水式真空泵;分析天平(Sartorius CP225D)。
1.2 试药芍药苷标准品，购自中国药品生物制品检定所(批号：110736-20073)。药材白芍、玫瑰花、
当归均购于石家庄乐仁堂药店(经鉴定均符合2005版《中国药典》标准)。甲醇为色谱纯，水为双蒸馏水，其余试剂、试药均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱为XDB C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为甲醇-水(40∶60);流速1.0 ml/min;检测波长230 nm;柱温25℃;进样量为10 μl;理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于2 000[4,5]。
2.2 对照品溶液制备精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥36 h的芍药苷标准品10.00 mg置100 ml容量瓶中，加甲醇溶解，定容，制成浓度为0.10 mg/ml的对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备称取白芍10 g左右3份。按配伍比例(白芍∶当归=1∶1;白芍∶玫瑰花=1∶1)称取玫瑰花、当归，与其中两份白芍配伍。4种供试品均加入15倍水浸泡1 h，用武火煮沸后，改用文火，持续加热45 min，倒出药液;再加10倍水，用武火煮沸后，改用文火，持续加热30 min，后合并两次药液，浓缩至100 ml，加入1.5倍95%乙醇醇沉4h后抽滤，留取滤液，回收乙醇，将药液放凉。然后依次用石油醚、醋酸乙酯、水饱和正丁醇萃取至无色，萃取液倒入蒸发皿中水浴挥干。残渣用甲醇溶解，置10 ml容量瓶中定容至刻度，从所得溶液中各取1 ml分别置500 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得供试品溶液(1号供试品为白芍，2号供试品为白芍配当归，3号供试品为白芍配玫瑰花)。冷藏，待用。
2.4 阴性对照液制备精密称取当归10.079 g，玫瑰花10.097 g，按供试品制备方法进行制备，从所得溶液中取1 ml置500 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得阴性对照液。冷藏，待用。
2.5 线性关系考察精密量取芍治疗癫痫病的最新技术药苷对照品溶液2，3，4，5，6，7，8 ml分别置10 ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀。进样10 μl，在上述色谱条件下测定峰面积。得到对照品不同浓度的色谱峰峰面积，以芍药苷溶液浓度(mg/ml)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=37 560 310.104X+408 791.582，r=0.999 6(n=7)。结果表明芍药苷在0.02～0.08 mg/ml浓度范围内线性关系良好。
2.6 精密度实验精密量取芍药苷对照品溶液(0.05 mg/ml)10 μl，重复进样5次，在上述色谱条件下测定峰面积。结果为RSD=0.7%，小于3%，说明仪器精密度良好。
2.7 稳定性实验精密量取3号供试品溶液10 μl，每隔4 h测定1次，共测定5次，在上述色谱条件下测定峰面积。峰面积的平均值为2 265 471，RSD=1.1%，结果表明样品溶液在16 h内稳定。
2.8 重复性实验
精密称取同一批白芍样品，按供试品溶液制备方法制备5份平行样品，进样10 μl。在上述色谱条件下测定峰面积。由峰面积得出芍药苷浓度，计算芍药苷浓度的RSD值为1.5%，结果表明本方法重复性良好。
2.9 加样回收率实验采用加样回收率测定法，精密量取“2.3”项中1号供试品溶液5 ml，置10 ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度。精密量取1 ml，共9份，每3份1组，每组分别加入对照品溶液0.04 mg/ml)0.8，1，1.2 ml。进样10 μl，在上述甘肃癫痫医院色谱条件下测定峰面积，计算回收率。计算公式为：回收率(%)=(测得量-供试品含量)/加入量×100%。回收率都在95%～105%之间，平均回收率为99.51%，RSD值为2.6%，结果表明本方法回收率较高。
2.10 样品含量测定
将1～3号供试品溶液进样10 μl，重复进样4次。在上述色谱条件下测定峰面积，计算其中的芍药苷含量。煎出量为：单味白芍组19.8 mg/g。白芍+玫瑰花组33.4 mg/g，白芍+当归组24.6 mg/g。色谱图见图1～5。
3 讨论
白芍始载于《神农本草经》：“主邪气腹痛，除血痹，破坚积，寒热疝瘕，止痛，利小便，益气。”在古方中，白芍充分发挥了滋阴补血、柔肝止痛、敛汗摄精、潜阳敛火等功用。究其传统方剂、临床多与肝经药物配伍，或气分药如柴胡，或血分药如玫瑰花等，以相须为用增强疗效。其功用是否与芍药苷煎出量有关，目前尚不十分清楚，故本实验选用归肝经药物当归、玫瑰花等，采用高效液相法检测其芍药苷的煎出量，以此完善或指导临床合理配伍用药，提高疗效。图1 对照品溶液高效液相色谱图图2 白芍供试液高效液相色谱图
3.1 配当归对芍药苷煎出量的影响肝体阴用阳，为藏血之脏。白芍酸甘补血敛阴，调经止痛;其性酸敛，守而不走。当归补血行血，为调经良药;其性辛香性散，走而不守。二药合用，一补一敛，散敛结合，补血而不滞血，行血而兰州专业治疗癫痫病的医院 不动血，养血和血之功最良[4]。本实验检测结果也证实当归对白芍中芍药苷煎出量有明显促进作用，较单味药白芍明显提高21%。图4 白芍配当归供试液高效液相色谱图 图5 阴性对照液供试液高效液相色谱图
3.2 配玫瑰花对芍药苷煎出量的影响肝藏血，“喜调达恶抑郁”。白芍酸敛微寒，入肝走血，善补血养阴柔肝;玫瑰花味辛气香，入肝走气，善于疏达肝气而活血调经。二药配伍，养血调肝，有助药效增强。本实验结果显示该组药液中芍药苷煎出量为33.4 mg/g，较单味药白芍明显提高69%;较白芍与当归组提高27%。
文献报道芍药苷的测定方法还有分光光度法[6]、薄层扫描法[7]、毛细管电泳法等，但均不如高效液相法准确，精密度高，应用范围广。
